“二辰丸”是一艘日本商船，光年绪三十四（1908）2月5日，此船偷运枪械2000余枝、子弹4万发进入中国海面，停泊于澳门附近的路环岛东面二海里处，在准备卸船之际，被中国水师巡船和海关关轮扣留，并降下船上日本国旗。船主在罪证面前不得不承认违法，表示服从惩处。但日本政府却和葡萄牙殖民者串通一气，向清政府发出抗议照会。日本声称“二辰丸”是在葡萄牙的领水上航行，该船械弹运往澳门已得葡澳官员批准，抗议清政府越境截捕商船，提出无条件释放“二辰丸”、中国备价收买“二辰丸”所载军火、赔偿损失、惩办有关人员、鸣炮谢罪等五项无理要求，并派出日舰到广东海面示威。葡澳当局无视澳门界址未定的现实，公然于2月18日照会中国政府外务部，声称“二辰丸”被扣留地点属葡国领海，中国当局截拿“二辰丸”，不仅有碍葡国领海权和主权，而且不利于澳门商务，要求即刻释放“二辰丸”。在帝国主义的外交压力下，清政府被迫屈服，于3月15日复照日使，同意释船并鸣炮谢罪、处分中国有关官员、赔偿日本的“损失”。消息传到广州，舆论哗然，认为这是中国的奇耻大辱。3月18日，粤商自治会陈惠普、李戒欺、罗少翱等召集群众千余人在广州集会，举着写有“挽回国权”四字的大旗到督署请愿，在督署门前发表演说，要求重新交涉。后群众增至万余人，情绪激愤，呈罢市暴动之势。3月19日，又召开有数千人参加的国耻纪念会，决定推行维护主权、抵制日货运动；还在广州城内遍贴标语，号召抵制日货。不少商店当众烧毁日货，群众相继拒购日货、拒用日本银元，仅40天内，广州口岸进口的日货价值减少约300万元。4月5日，广州妇女2000人召开大会，抗议日本政府借“二辰丸”事件公然侵犯我国主权。4月11日，广州抵制日货运动扩大，南海县搬运工数百人，拒绝装卸日船运来之煤。省内各地和上海、香港、梧州、南宁、香港、南洋群岛的群众和华侨纷纷响应，相继宣布抵制日货。

抵制日货运动使日商损失惨重，3月22日，日公使强迫外务部会同粤督严禁粤商抵制日货。5月8日，日本驻京代理公使阿部守太郎为广东排斥日货之事，再次向外务部“抗议”。但广州人民坚持斗争，运动持续达8个月，致使日本对华南的进出口贸易大为下降。10月2日，因广州民情愤激，日本驻广州领事照会两广总督，答允撤销“二辰丸”案的赔款要求。

二辰丸事件使全国各界人士，尤其是广州、香山等地人民认识到葡萄牙殖民者妄想侵占我国领土、领海的企图，强烈要求澄清澳门地界，清政府中也有不少官员认识到澳门界址不定的危害，积极支持早日定界。此后，中葡两国政府就澳门界址问题举行了一系列谈判。